请问如何培养肝癌细胞株(Hep3B)?
请问如何培养肝癌细胞株(Hep3B)?
实验方法?
实验流程?
实验材料?
最后如何计算细胞存活率?
最佳解答:
*细胞培养:
将Hep 3B肿瘤细胞株培养于含有10 % 牛血清(Fetal Bovine Serum, FBS)、1% Gentamycine、1.5 g/L sodium bicarbonate及1.0 mM sodium pyruvate之MEM (Minimum essential medium)生长培养液内，将细胞培养于75 cm2 flask，并置于37℃、5％CO2的培养箱中培养，当细胞生长至八、九分满时，再进行细胞继代培养。细胞长满后，先行抽干培养液，以phosphate buffered saline (PBS)清洗细胞表层，再将PBS抽掉并加入1 mL 0.25% Trypsin-EDTA，放置于培养箱作用5分钟，加入10 mL的培养液冲散细胞并吸出悬浮液至于15mL离心管中，1200 rpm离心3分钟，去除上清液，以1：4的比例加入新鲜培养液将细胞均匀冲散，少许的细胞放回原75 cm2 flask继续培养，其余的细胞悬浮液依实验目的均匀分配到不同的培养皿中。
*细胞存活率计算:
Trypan blue是一种常用的细胞染色剂，能够将死亡的细胞染上蓝色，存活的细胞则不会被染色。细胞以0.5×105 cells/well的数目培养于6-well /plate中，培养一天后，投与不同浓度的DB，并培养于培养箱当中，每隔12小时将plate取出；Hep3B及HT-29用Trypsin-EDTA 200 μL处理后收集细胞，而Colo 205则先将原在well中培养液的细胞放置于15mL 离心管，剩下的贴附的细胞用Trypsin-EDTA处理后置于同一离心管当中；加入等量trypan blue稀释并用血球计数器计数活细胞数目。
其他解答:
＊细胞培养＊ 将Hep 3B肿瘤细胞株培养于含有10 % 牛血清(Fetal Bovine Serum, FBS)、1% Gentamycine、1.5 g/L sodium bicarbonate及1.0 mM sodium pyruvate之MEM (Minimum essential medium)生长培养液内，将细胞培养于75 cm2 flask，并置于37℃、5％CO2的培养箱中培养，当细胞生长至八、九分满时，再进行细胞继代培养。细胞长满后，先行抽干培养液，以phosphate buffered saline (PBS)清洗细胞表层，再将PBS抽掉并加入1 mL 0.25% Try …[ 详读全文 ] 相关问题：得健网之问答内容不能作为疾病诊断或治疗之依据，亦无法取代医生的诊断或治疗。若有任何身心不适症状，仍应尽速就医。