流式细胞仪分析
1.请问：若我做“健康状态的正常细胞”饥饿压力的模式(缺血清)，细胞周期G1、G2、S期与无饥饿压力的正常细胞相比，应该有怎样的减少或增加的情形才有意义？(单染PI看Cell Cycle)
2.请问：late apoptosis的细胞才能让PI染剂染到吗？(是因为凋亡晚期细胞膜才能接受染剂？) 这是指凋亡晚期细胞膜破了吗？若是的话，与necrosis又有何差别呢？还是PI可以染无论是早期或晚期的apoptosis？
最佳解答:
哈啰~~
在第一个问题方面:
因为我之前有做过Cell cycle方面的实验~
我印象中~当细胞在缺血清的medium状况下~
这时候的cell应该是会arrest G0/G1 phase~
通常会做这种实验,最主要是要测定cell cycle arrest~~
意思就是说~让cell全部在一样的起跑点~~
比如说~我想要知道~某一个药物是否会造成cancer cell /cell cycle arrest~
我可以一开始先将全部的cancer cell 处理没有血清的medium~
先让cancer cell 全部停留在同一个时期(印象中约12~18hrs吧)~
之后~我们再将medium换成有加血清的~并且处理药物~~
依照不同实验设计~再收集cell~上flow~
如果药物会造成cell cycle arrest~则会明显看到某phase peak会变高~
但是记得还是要跟control比喔~~
至于第二个问题~
应该并不是late apoptosis的细胞才能让PI染剂染到~
像我们以前实验室的做法~我们都会先以绝对酒精固定细胞膜~在利用PI上flow~就是将细胞膜打洞~让PI可以进入核内~
其实PI好像无法真确判断apoptosis or nerosis~
大多数都会以PI+annexin V~比较可以确定~
其实如果你要确定cell apoptosis~
应该不只用PI来判断~
你可能要再经由抽DNA ladder,western blotting,real-time PCR等~~
来观察相关的apoptosi protein, RNA表现量~~
p.s写的有点复杂~~在加上毕业一段时间噜~~可能有些地方不是很正确~~但是希望对你有帮助~
其他解答:
1.应该在G2/M期的peak会有增加的现象(表示拘留)!2.PI不会透过细胞膜 结合至DNA，只有坏死细胞因为破裂才会染上
所以要染凋亡细胞 你可以用TUNEL去标记凋亡 而坏死用PI
早期的细胞凋亡 需要用annexin V 和PI 双染分别去看凋亡和坏死细胞
晚期的细胞凋亡 可以用TUNEL 和PI去看凋亡和坏死细胞 相关问题：
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